自動(dòng)核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)自動(dòng)完成樣本核酸的提取工作的儀器，核酸提取儀分為兩類(lèi)：一類(lèi)是大型的自動(dòng)化的，一般稱(chēng)為自動(dòng)液體工作站；另一類(lèi)是小型自動(dòng)核酸提取儀，利用封裝好的配套試劑自動(dòng)完成提取純化過(guò)程。

 

　　它是以納米生物磁珠為載體的一種新型核酸提取技術(shù)，核酸分子可與磁珠表面的硅羥基發(fā)生特異性識(shí)別與結(jié)合，在外部磁場(chǎng)的作用下發(fā)生聚集或分散，擺脫傳統(tǒng)核酸提取過(guò)程中離心、抽取上清液等手工操作流程，從而實(shí)現(xiàn)核酸的自動(dòng)化提取。廣泛應(yīng)用于臨床疾病診斷、輸血安全、法醫(yī)學(xué)鑒定、環(huán)境微生物檢測(cè)、食品安全檢測(cè)、分子生物學(xué)研究等多種領(lǐng)域。


  

 

磁珠法核酸提取一般包括裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫四個(gè)主要步驟，每一步驟又可由多種不同的方法單獨(dú)或聯(lián)合實(shí)現(xiàn)，其中裂解環(huán)節(jié)是決定提取之質(zhì)量的重中之重，經(jīng)常也會(huì)有老師問(wèn)到應(yīng)該如何對(duì)裂解液進(jìn)行優(yōu)化。那么，我們就來(lái)分析一下配置裂解液經(jīng)常用的試劑及其作用原理。

 

　　1、鹽酸胍、尿素

 

　　鹽酸胍在濃度為4－8mol時(shí)可斷裂氫鍵，有兩種可能機(jī)制：1、變性蛋白和鹽酸胍、尿素優(yōu)先結(jié)合，形成變性蛋白－變性劑復(fù)合物，當(dāng)復(fù)合物被除去，引起N－D反應(yīng)平衡向右移動(dòng)，隨著變性劑濃度增加，天然狀態(tài)的蛋白不斷轉(zhuǎn)變?yōu)閺?fù)合物，導(dǎo)致蛋白質(zhì)*變性；2、鹽酸胍、尿素對(duì)氨基酸具有增溶作用，能形成氫鍵，當(dāng)濃度高時(shí)，能破壞水的氫鍵結(jié)構(gòu)，成為非極性殘基的較好溶劑，使蛋白質(zhì)內(nèi)部的疏水殘基伸展和溶解性加強(qiáng)，鹽酸胍、尿素引起的蛋白變性往往是不可逆的。

 

　　2、異硫氰酸胍

 

　　蛋白質(zhì)變性劑，能迅速溶解蛋白質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋白由于其二級(jí)結(jié)構(gòu)的破壞消失而迅速與核酸分離。在通常使用的蛋白質(zhì)變性劑中作用強(qiáng)的是異硫氰酸胍，它們可以使多數(shù)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換成一種隨機(jī)的卷曲狀態(tài)。含有強(qiáng)的陰離子和陽(yáng)離子基團(tuán)，它們可以形成較強(qiáng)的氫鍵。在還原劑存在的情況下，異硫氰酸胍可以斷裂氫鍵，而去垢劑，如SDS存在的情況下，可以破壞疏水作用。